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羧甲基壳聚糖复合奥硝唑后对口腔重要厌氧菌

唐涛[1]    薛毅 信玉华2
【摘要】 目的 : 通过羧甲基壳聚糖、单纯奥硝唑及羧甲基壳聚糖复合奥硝唑对4株口腔重要厌氧菌的抑菌性能MIC的比较,评价羧甲基壳聚糖复合奥硝唑对口腔重要厌氧菌增效抑菌作用。方法 : 采用培养基液体梯度倍倍稀释法测定以上三者对口腔重要厌氧菌牙龈卟啉菌ATCC33277、放线共生放线菌Y4、中间普氏菌ATCC25261、牙髓卟啉菌ATCC35406的最低抑菌浓度(MIC)。结果 : 经测定羧甲基壳聚糖、奥硝唑、奥硝唑羧甲基壳聚糖复合后对上述4株厌氧菌的MIC分别为20000、10000、5000、5000µg/ml。5、40、80、>160µg/ml。1.25、20、20、40µg/ml。结论 : 奥硝唑和羧甲基壳聚糖两者联合应用对抑菌性能有加强作用。为临床应用提供参考。
【关键词】 羧甲基壳聚糖 ; 奥硝唑羧甲基壳聚糖; 口腔厌氧菌 ; 最低抑菌能度(MIC)
Evaluating the enhance bacteriastasis efficiency of Ornidazole of Carboxymethyl Chitosan

Tang Tao  Xue Yi  Xin Yu Hua(Tsinghua University Hospital )

AbstractObjectives : By  compearing of Minimum inhibitory concentration (MIC) of Carboxymethyl Chitosan, Ornidazole and Carboxymethyl Chitosan Ornidazole was measured by gradient dilution method  .  To evaluate the enhance bacteriastasis efficiency of Ornidazole of Carboxymethyl Chitosan . Materials and
Methods: Four international standard oral anaerobic species, Porphyromonas gingivalis ATCC33277, Actinobacillus Actinomycetemocomitans Y4, Prevotella intermedicus ATCC25261 and Porphyromonas endodontalis ATCC35406 were selected as the target. Minimum inhibitory concentration (MIC) of Carboxymethyl Chitosan, Ornidazole and  Carboxymethyl Chitosan Ornidazole was measured by gradient dilution method. Results : The MICs of Carboxymethyl Chitosan, Ornidazole and Ornidazole of Carboxymethyl Chitosan on Four international standard oral anaerobic species  was respectively 20000、10000、5000、5000 µg/ml .  5、40、80、>160µg/ml .  1.25、20、20、40µg/ml.  ConclusionCarboxymethyl Chitosan can enhance the bacteriostasison of Ornidazole to 4 oral anaerobic bacterial.
Key words: Carboxymethyl Chitosan Ornidazole of Carboxymethyl Chitosan oral anaerobic species   Minimum inhibitory concentration (MIC)  
壳聚糖由甲壳类生物的外壳经加工提取而成,是自然界中唯一带阳离子的高分子氨基葡聚糖。羧甲基壳聚糖是壳聚糖的衍生物,有良好的水溶性,具备壳聚糖的一般功效且吸收更快,是一种良好的药物载体〔1〕。本试验选择与口腔疾患特别是与牙周、尖周感染密切相关的细菌牙龈卟啉菌、放线共生放线菌、中间普氏菌、牙髓卟啉菌进行MIC测定,评价羧甲基壳聚糖及其复合奥硝唑后对口腔厌氧菌的抑菌性能,为羧甲基壳聚糖复合奥硝唑在治疗牙周、根尖周组织病中的局部用药的方便剂型提供参考资料。
 
1    材料与方法
1.1  试验菌株
牙龈卟啉菌ATCC33277、放线共生放线菌Y4、中间普氏菌ATCC25261、牙髓卟啉菌ATCC35406
1.2  细菌培养
CDC厌氧液体培养基将上述相应的菌株分别进行厌氧菌培养,细菌分别在37°C培育48-72小时,比浊法稀释至菌量108/ml。
1.3  试验样品制备
1.3.1  羧甲基壳聚糖(青岛海生生物工程有限公司所提供,批号:200208)主要性状:呈原白色片状,成份:灰份<0.5%,水份<10%,pH值:7-8,脱乙酰度>80%,细菌总数:<300个/克,含砷量<1PPM,重金属含量<10PPM。分子量:20万左右。
1.3.2  用相应的液体培养基稀释配制80000、60000 、40000、20000、10000、5000、2500µg/ml羧甲基壳聚糖培养液,经高压消毒后4°C保存备用。
1.3.3  用相应的液体培养基配制2%羧甲基壳聚糖培养液,分别加入奥硝唑,其含量分别为160、80、40、20、10、5、2.5、1.25µg/ml的培养液。
1.3.4  用相应的培养基液体稀释奥硝唑粉剂(西安博华制药有限责任有限公司提供,批号20018156),制备成含160、80、40、20、10、5、2.5、1.25µg/ml的奥硝唑培养液
1.4  最低抑菌浓度的测定
取上述三种不同梯度的待检培养液各2ml,分别加入菌液50µl(108/ml),一式三份,分别在37℃温箱培养48-72小时后观测记录对4株厌氧菌的最低抑菌浓度MIC。
 
2    结果
表-1  奥硝唑羧甲基壳聚糖复合后对4株重要口腔厌氧菌的MIC(ug/ml)测定

分 组
牙龈卟啉菌
放线共生放线菌
中间普氏菌
牙髓卟啉菌
羧甲基壳聚糖
20000
10000
5000
         5000
奥硝唑
5
40
80
>160
奥+羧甲壳聚糖
1.25
20
20
40

3    讨论
      牙龈卟啉菌在慢性牙周炎发病中具有重要意义[2]。放线共生放线菌与侵袭性牙周炎密切相关,中间普氏菌等在病变龈下菌斑中广泛存在[3],牙髓卟啉菌与牙髓、根尖周病的感染有特殊的关系[4], 有学者[5]证明水溶性壳聚糖对革兰氏阳性菌抑菌作用显著如金黄葡萄球菌MIC为1.6mg/ml, 对白色念株菌的MIC为10mg/ml。关于羧甲基壳聚糖对口腔细菌的抑菌评价仅见刘瑾学者[6]对变形链球菌、口腔乳酸杆菌的抑菌性能的评价报道,而对其他口腔重要致病厌氧菌的抑菌性能的评价未见报道。
由表-1结果可以看出奥硝唑对中间型类杆菌、牙髓卟啉菌两菌的抑菌性能相对较弱,而对牙龈卟啉菌抑菌性能较强。在本试验条件奥硝唑对所选口腔致病菌国际标准菌株的MIC为5~40µg/ml,与唐明的文献报道[7]奥硝唑对牙龈卟啉菌的MIC为<0.031~8 mg/L(µg/ml)基本相近。还发现将奥硝唑溶于羧甲基壳聚糖溶胶后对牙龈卟啉菌、中间普氏菌、牙髓卟啉菌、放线共生放线菌的MIC值比单纯奥硝唑的降低了1-2个试验梯度,表明羧甲基壳聚糖与奥硝唑对实验菌株抑菌性能有联合加强的现象。
羧甲基壳聚糖具有无毒、无致畸性、无刺激性、无免疫原性。研究证实壳聚糖具有良好的组织相容性、抗菌性和增强机体免疫力、促进组织修复的功能,且安全性高于蔗糖[8]。由于羧甲基壳聚糖的分子结构中有带正电荷的质子化铵,与细菌带负电荷的细胞膜作用,吸附和聚沉细菌[9],同时羧甲基壳聚糖可能穿过作用损伤后的细胞壁进入细胞内部,与细胞内的物质进一步作用,扰乱细菌的合成和代谢从而具有一定的抑菌作用[10]。并由壳聚糖抑菌机制研究[11]推知水溶性壳聚糖能刺激吞噬细胞及刺激单核细胞激活因子,刺激T淋巴细胞的分化增殖,提高NK细胞活力诱导IL-1、IL-2的产生。由此得出羧甲基壳聚糖在体内可能不是对细菌直接杀灭作用,而有可能通过改变局部微生态环境,刺激局部的免疫因子释放,调动非特异性免疫反应间接发挥杀菌作用。
奥硝唑是一种继甲硝唑、替硝唑之后的第三代新型硝基咪唑类衍生物,具有更强的抗厌氧菌力且副作用小。它在体内主要以细胞毒作用的原药和具有细胞毒作用的中间产物透过厌氧菌微生物细胞后破坏DNA使其螺旋结构断裂或阻断其转录复制,而至其死亡,达到抗菌目的[12]
另外可能是壳聚糖所带正点荷增加了与细菌细胞的结合,通过与细胞膜的相互作用,导致紧密结合的膜蛋白结构重构,从而使药物通过细胞旁径增加其运转[13];壳聚糖结合细菌细胞壁后有可能改变了其胞壁上的某些通道,利于奥硝唑顺利通过进入细胞内,提高了奥硝唑的杀菌作用;另外不除外羧甲基壳聚糖与奥硝唑某些化学基团发生结合,改变了相应的化学结构,提高了抗菌性能。其具体机制有待深入研究证实。
实验提示,羧甲基壳聚糖复合奥硝唑后对口腔重要厌氧菌的良好的抑菌性能,能有效的控制口腔牙周致病菌,阻止牙周组织的破坏,从而用于牙周炎的辅助治疗,改善牙周炎的临床症状。在治疗牙周、根尖周组织病中,局部用药的方便剂型应用改进提供参考资料。
 
参考文献
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发布时间: 【 2008-03-21 】   访问计数: 【 8783 】      【返回顶部】

 
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